Правил универсальных мер безопасности медицинского персонала от инфекций. Правила биологической безопасности при ра­боте с патогенными микробами Правила работы с биологическими объектами в лпу

В общем виде алгоритм забора, маркировки и транспортировки биологических материалов можно представить следующим образом:

1) вымыть руки;

2) асептически подготовить место работы;

3) взять пробу с соблюдением требований асептики, надеть перчатки, если это необходимо; не кашлять, не чихать, не разговаривать;

4) получить достаточное количество материала;

5) собрать и транспортировать материал в стерильном контейнере;

6) прикрепить этикетку с указанием ФИО пациента, диагноза, отделения, палаты, даты и времени получения материала, цели исследования;

7) правильно хранить и быстро доставлять материал в лабораторию.

Взятие отдельных видов биологического материала производится следующим образом:

I Сбор мочи

1. Объяснить пациенту цель обследования, получить его согласие;

2. Женщинам подмыться тщательно кипяченой водой с мылом, проводя рукой от лобка к крестцу;

3. Осушить правую и левую половые губы и наружное отверстие мочеиспускательного канала;

4. Мужчине взять половой член, отодвинуть крайнюю плоть и вымыть водой с мылом, осушить головку полового члена;

5. Взять емкость для сбора мочи;

6. Первая порция мочи выпускается в унитаз, на анализ берут вторую порцию;

7. Закрывают емкость с мочой и отправляют на анализ.

II.Сбор мокроты

1.Объяснить цель исследования;

2. Накануне вечером почистить зубы;

3. В стерильную посуду, после откашливания не касаясь краев банки сплюнуть мокроту, сразу же закрыть крышку;

4. Мокроту доставить на анализ не позднее двух часов после сбора.

III. Сбор кала

1. Объяснить цель исследования;

2. Вариант 1. Взятие кала из прямой кишки стеклянной палочкой: Надеть перчатки, левой рукой раздвинуть ягодицы, правой рукой взять из пробирки стеклянную палочку, ввести вращательными движениями в прямую кишку на глубину 6-8 см., извлечь палочку и поместить в пробирку с консервантом.

3. Вариант 2. Взятие кала после опорожнения кишечника. В сухое чистое судно опорожняется кишечник. Стерильным шпателем взять кал, слизь, гной в стерильную банку. Отправить в санбаклабораторию.

IV. Мазок из зева

2. Материал берется натощак или не ранее чем через 2 часа после еды, питья, полоскания горла;

3. Попросить пациента широко открыть рот;

4. Левой рукой придавить шпателем корень языка;

5. Правой рукой осторожно ввести стерильный тампон и снять налет на границе пораженного участка. Материал поместить в стерильную пробирку;

V. Мазок из носа

1. Объяснить цель обследования;

2. Левой рукой приподнять кончик носа;

3. Правой рукой взять стерильную палочку с ватным тампоном и вращательными движениями ввести в носовой ход на глубину 1-2см;

4. Полученный материал помещают в стерильную пробирку;

7. Литература

Основная

Кузнецов Н.А., Бронтвейн А.Т. Уход за хирургическими больными: учебник. –М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. ––288 с.

Евсеев М.А. Уход за больными в хирургической клинике: учебное пособие. –М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. –192 с.

Шевченко А.А. Клинический уход за хирургическими больными. «Уроки доброты»: учебное пособие для медицинских вузов. –М.: ГЭОТАР-Медиа. –2008. –416 с.

Дополнительная

Вебер В.Р. Основы сестринского дела: учебное пособие для медучилищ. –М.: Медицина. –2001. –496 с.

Венцел Р.П. Внутрибольничные инфекции (пер. с англ.) –М.: Медицина. –1990.

Общий уход за больными: учебное пособие /Под ред. В.Н.Ослопова и О.В.Богоявленской. –М.: ГЭОТАР-Медиа. –2006. –400 с.

Основы асептики и ухода за хирургическими больными: учебное пособие для медвузов /Под ред. В.И.Оскреткова. –Ростов-на-Дону: Феникс. –2007. –608 с.

Основы ухода за хирургическими больными: учебное пособие для медвузов /Под ред. А.А.Глухова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. –288 с.

Садикова Н.Б. Тысяча советов медсестре по уходу за больными. –Минск: Современный литератор. –2002. –832 с.

Уход за хирургическими больными: учебное пособие для медвузов /Под ред. Б.С.Суковатых. –М: МИА. –2007. –496 с.

Харди И. Врач, сестра, больной. Психология работы с больными (пер. с венгер.) –Будапешт. –Издательство Академии наук Венгрии. –1988.

УО «Пинский государственный медицинский колледж»

Дисциплина «Сестринское дело и манипуляционная техника»

Специальность «Лечебное дело»

Учебно-информационный материал

К практическим занятиям

По разделу № 8 «Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования»

Практические занятия №№ 25-26

Рассмотрен, обсужден и утвержден

На заседании цикловой комиссии

«Сестринского дела и манипуляционной техники,

Скорой и неотложной медицинской помощи»

Протокол № ____ от ____________20 г.

Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования

Тема: « Подготовка пациентов к лабораторным методам исследования»

Практическое занятие № 26

«Правила подготовки пациента сбор материала для лабораторных исследований».

Вопросы:

1. Характеристика основных лабораторных методов исследования мокроты.

2. Подготовка пациента, собор мокроты на общий анализ, направить материал в лабораторию.

3. Подготовка пациента, собор мокроту на бактериологическое исследование, направление материал в лабораторию.

4. Характеристика основных лабораторных методов исследования мочи.

5. Подготовка пациента и собор мочи на общий анализ.

6. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Зимницкому;

7. Подготовка пациента и собор мочи для исследования на сахар.

8. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Нечипоренко.

9. Характеристика основных лабораторных методов исследования кала.

10. Подготовка пациента для сбора кала на скрытую кровь, собор и направление материал на исследование;

11. Подготовка пациента, собор кала на яйца гельминтов и направление материал на исследование.

12. Правила взятия мазков из зева и носа и направление на исследование.

13. Правила оформления направления на исследование.

14. Вопросы и практические задания для самоконтроля

Характеристика лабораторных методов исследования мокроты

Мокрота – это патологический секрет дыхательных путей. В диагностике заболеваний дыхательной системы важное место занимает исследование мокроты, позволяющее судить о характере патологического процесса. При общеклиническом исследовании мокроты определяют ее физико-химическое свойства и клеточный состав. При бактериологическом исследовании мокроты выявляют возбудителя патологического процесса, а также производят подбор антибиотика, эффективного при данном возбудителе.

Мокро́та (лат. sputum) - отделяемый при отхаркивании патологический секрет трахеобронхиального дерева с примесью слюны и секрета слизистой оболочки полости носа и придаточных пазух носа. Мокрота является ценным диагностическим материалом. Исследование мокроты:

ü Макроскопическое – обращают внимание на: характер мокроты, количество, цвет, запах, консистенцию, слоистость, наличие различных включений

ü Микроскопическое – проводится в свежих неокрашенных и фиксированных окрашенных препаратах. Элементы мокроты, которые обнаруживаются в нативном препарате: клеточные элементы, волокнистые образования, кристаллические образования.

ü Бактериоскопическое – позволяет выделить возбудителя заболевания в чистом виде при посеве мокроты на питательные среды, определить вирулентность и лекарственную устойчивость (чувствительность) выделенного микроорганизма, что необходимо для рационального подбора антибактериальных средств.

ü Цитологическое – с учетом соотношения ее клеточных элементов имеет значение для оценки активности заболеваний бронхов и легких, помогает установить преимущественность инфекционного или аллергического воспаления.

Правила техники безопасности при работе с биоматериалом

В экскрементах, носоглоточных выделениях, мокроте, моче и рвотных массах концентрация ВИЧ очень низка или ВИЧ не обнаруживается.

Однако соблюдать меры предосторожности необходимо, т.к. это позволит предотвратить передачу от пациентов других инфекционных агентов.

Меры предосторожности :

1. Избегайте непосредственного контакта с биологическими жидкостями. Работайте только в перчатках. Не допускайте боя лабораторной посуды и травм осколками стекла.

2. Обеззараживайте выделения пациентов перед сливом в канализацию.

3. Тщательно дезинфицируйте лабораторную посуду, судна, мочеприемники, петли для забора кала и т.д.

4. В случае попадания биоматериала на кожу, одежду, слизистые, немедленно провести обработку, следуя рекомендациям из приказа №351.

В целях предупреждения инфицирования мед. персонала необходимо рассматривать всех пациентов как потенциально инфицированных парентеральным гепатитам и ВИЧ – инфекцией или другими переносимыми с кровью и биологической жидкостью вирусными заболеваниями, и следует строжайшим образом соблюдать меры предосторожности.

1. Избегать случайных травм инструментами, инфицированными потенциально зараженным материалом и контакта открытых поражений кожи с биологическими материалами: кровью, спермой, вагинальными выделениями, спинно – мозговой жидкостью, синовиальной, плевральной, брюшной, перикардиальной, околоплодной жидкостью. Концентрация вируса низка или не обнаруживается в выделениях носовой полости, слюне слезах, рвотных массах, моче.

• Не сгибайте, не ломайте иглы после их использования и не надевайте на них колпачки до обработки.
• Колющие и режущие предметы не передавать из рук в руки, а класть в нейтральную зону.
• Обработку острых предметов и игл проводить отдельно от других инструментов.
• Обработку острых, режущих инструментов и игл проводить в перчатках.
• Одноразовые режущие- и колющие предметы после дезинфекции складывать в непрокалываемые контейнеры, сделанные из плотного картона, пластмассы или металла, которые впоследствии утилизуются или идут в переработку.

2. При работе с образцами крови, жидкостями, экскрементами и секретами организма пациентов, а также с материалами и объектами, подвергающиеся загрязнению ими, пользоваться перчатками и желательно менять их после каждого пациента, использовать только целые перчатки из латекса достаточной толщины.

3. Не забывайте тщательно мыть руки и кожу сразу после контакта с жидкостями организма, а также перед и после выполнения манипуляции. Руки должны быть тщательно вымыты, даже если до этого были одеты перчатки. Забор крови проводить одноразовыми шприцами,

4. Пользуйтесь спец. одеждой – халатом, колпаком, маской, очками, водонепроницаемым фартуком и др.

5. Кровь и другие биологические жидкости должны иметь специальную маркировку, при транспортировке все образцы должны быть помещены во второй контейнер или герметичную сумку (спец. контейнер).

6. Необходимо соблюдать максимальную осторожность при заборе крови, при работе с пробирками, заполненными кровью. Не допускать разбрызгивания крови. При разбрызгивании крови следует быстро очистить загрязненную поверхность дезинфицирующим раствором (ОСТ 42-21- 2-85).

7. Шприцы, иглы, колющий и режущий инструментарий многоразового использования обрабатывается по ОСТу 42-21-2-85 и приказу № 408.

8. Важно ограничить инъекции и другие чрезкожные процедуры, сокращение числа ненужных инъекций является важным мероприятием для защиты как медицинских работников, так и пациентов.

9. Использованные тампоны с кровью, иглы, шприцы и другой инструментарий погружать в 3 % раствор хлорамина на 1 час или 6 % перекись водорода на 6 часов, одноразовый инструментарий в 5% раствор хлорамина.

10 . Неукоснительно соблюдать режим дезинфекции, предстерилизационной очистки, стерилизации!

11 . Соблюдать бельевой режим – белье менять по мере загрязнения, регулярно, но не менее 1 раза в 7 дней, Загрязненное белье пациента подлежит немедленной замене.

Смотрите также:

ОСНАЩЕНИЕ: Маркированный инвентарь 2 ведра («Дезинфицирующее средство» и «Вода») швабра («Процедурный кабинет») кастрюли или контейнеры, ветошь (для различных предметов отдельная!) дезинфицирующее средство (р-р хлорамина). АЛГОРИТМ Проводится не реже 2-х раз в день влажным способом с применением 3% р-ра хлорамина или 3% р-р перекиси водорода + 0,5% моющее средство. Обработать вертикальные и горизонтальные поверхности...

ПОКАЗАНИЯ: отсутствие возможности или наличие противопоказаний для приема лекарственных средств внутрь и парентерально; местное воздействие на воспалительные процессы в толстой кишке; судороги; резкое возбуждение. ОСНАЩЕНИЕ: Стерильные: резиновый баллончик; лотки; газоотводная трубка; шпателя; емкости для шпателей; перчатки маска; клеенчатый фартук; дополнительный промаркированный халат "Для клизм"; пеленка; вазелин; клеенка; фантом...

Цели: Краткосрочная: пациент продемонстрирует знания о способах улучшения сна через 2 дня. Долгосрочная: пациент отметит улучшение сна к концу недели. Характер сестринских вмешательств: Медсестра проведёт беседы с пациентом о способах улучшения сна по 10 минут ежедневно в течении 3-х дней. Медсестра обеспечит чистоту, тишину, и свежий воздух в палате (температура воздуха в палате 18-20). Медсестра будет следить за соблюдением...

Рассматривать кровь и биологические жидкости пациента, все образцы лабораторных анализов, белье (загрязненное кровью и выделениями пациента) потенциально-инфицированными.

Медработники при поступлении на работу проходят медицинский осмотр с обследованием на сифилис, вирусные гепатиты В, С и ВИЧ-инфекцию. Повторные медосмотр и обследование проводятся согласно нормативных документов.

Медперсонал должен проходить инструктаж по технике безопасности.

Медицинские работники, контактирующие с кровью и биологическими средами (жидкостями), должны быть привиты против вирусного гепатита В.

Медицинские манипуляции, диагностические исследования следует проводить в отведенных для этих целей помещениях.

В рабочих помещениях, где существует риск профессионального заражения, запрещается есть, пить, курить, пользоваться косметикой, брать в руки контактные линзы (в каждом лечебно-диагностическом отделении должны быть помещения для персонала).

Необходимо правильно организовать рабочее место: безопасный, непрокалываемый контейнер необходимо установить на столе или другой поверхности на расстоянии вытянутой руки. Заполнять медицинскую документацию необходимо на чистом столе.

В ходе проведения манипуляций пациенту, персонал не должен вести записи, прикасаться к телефонной трубке и т.п.

В ходе выполнения манипуляции, не следует садиться на постель пациента.

В кабинетах, где проводится инвазивные манипуляции необходимо иметь аварийную аптечку.

При наличии на коже микротравм, экземы и дерматита перед началом рабочего дня необходимо закрывать поврежденные участки лейкопластырем, водонепроницаемыми повязками, напальчниками.

При работе использовать защитную спецодежду (халат, шапочка, сменная обувь) и средства индивидуальной защиты (перчатки, очки, щитки (экраны), маски (респираторы), фартуки). Халат, шапочка должны максимально защищать открытые участки кожи и волосистую часть головы. Сменная обувь, легко моющаяся из нетканых материалов. Перчатки при работе с кровью, биологическими средами, при возможном контакте со слизистыми и поврежденными участками кожи, а также при парентеральных манипуляциях - должны быть из латекса или синтетических материалов, приравненных к латексу. Если при выполнении манипуляций есть вероятность разбрызгивания биологических жидкостей необходимо использовать защитные очки, щитки (экраны), маски, респираторы и фартуки. Средствами индивидуальной защиты персонал должен обеспечиваться в необходимом количестве и соответствующего размера.

Строго соблюдать правила мытья рук и снятия перчаток. Перчатки снятые в процессе проведения манипуляции не использовать повторно.

При загрязнении перчаток кровью и выделениями пациента без их разрыва, во избежание загрязнения рук в процессе их снятия, следует тампоном (салфеткой), смоченным раствором дезинфицирующего средства (или антисептика), снять видимые загрязнения, затем снять перчатки в дезраствор. После снятия перчаток руки обработать антисептиком.

По возможности не прикасаться к инфицированному материалу.

Использовать безопасный, удобный медицинский инструментарий (атравматический) и устройства с защитными приспособлениями (самоблокирующиеся шприцы, вакуумные системы для бесконтактного забора крови и др.).

Осторожно обращаться с острым инструментарием, избегая случайных повреждений:

Осторожно открывать флаконы и ампулы;

Не передавать острые предметы из рук в руки, а через нейтральную зону (лоток);

Не следует надевать колпачок на иглу после инъекции;

Не следует вручную отсоединять иглу, а пользоваться деструктором, иглоотсекателем (пинцетом);

Не следует сгибать или ломать использованную иглу;

Убирать использованный колющий и режущий инструментарий в непрокалываемые контейнеры;

Проводить выемку инструментов после дезинфекции с помощью пинцета, корнцанга;

Упавшие иглы поднимать пинцетом или магнитом.

Забор крови осуществлять иглой со шприцем или вакуумными системами для взятия венозной крови. Пробирки с кровью должны быть закрыты пробками. Перемешивать кровь только в пробирках, закрытых пробкой. Бланк направления в лабораторию не помещать на пробирки с кровью. Пробирки маркировать, а номер ставить в направлении, которое помещается в специальный контейнер отдельно от штатива с пробирками.

Забор анализов мочи, рвотных масс, кала и других биологических сред организма осуществлять в ёмкости с крышками, используя спецодежду, средства индивидуальной защиты и соблюдая технику безопасности. Бланк направления помещать отдельно от ёмкостей с анализами, доставку анализов в лабораторию производить в специальном контейнере.

Предстерилизационную обработку использованного инструментария многократного применения проводить в плотных латексных перчатках или синтетических перчатках приравненных к латексу после предварительной дезинфекции. Работа с медицинскими отходами класса Б и В производится в таких же перчатках.

Смену и сортировку загрязненного белья кровью и биологическими средами, следует проводить в перчатках, маске, халате и шапочке; при сортировке дополнительно использовать фартук. Загрязненное кровью и биологическими жидкостями бельё замачивают в дезрастворе.

При попадании крови или биологических жидкостей на халат (одежду) необходимо снять его и погрузить в дезраствор (халат однократного применения можно продезинфицировать физическими методами, например: паровым) в концентрации соответствующей режиму дезинфекции при вирусных гепатитах.

При попадании крови и биологических жидкостей на поверхность проводят дезинфекцию препаратами, имеющими режимы обеззараживания крови согласно методическим рекомендациям (например: Виркон, Дензибак супер, Хлормикс, Септусин М).

При аварийной ситуации проводить постконтактную профилактику, в том числе экстренную вакцинацию против вирусного гепатита В.

При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных мик­робов во избежание заражения персонала лаборатории необхо­димо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности воз­будителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.

Первый уровень (работа с непатогенными микроорганиз­мами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).

Второй уровень (работа с низковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных от­ходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвраще­ния попадания микробов в воздух рабочего помещения выпол­нение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осу­ществлять в специализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.

Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в спе­циализированных боксах.

Четвертый уровень (работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена ис­ключительно в специализированных режимных лабораториях,

Имеющих оборудование, необходимое для эффективной защи­ты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одеж­ды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материа­лом необходимо осуществлять в специализированных на­стольных боксах, снабженных системами стерилизации возду­ха (см. тему 7.1).

■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберку­леза, гонококки и др.), имеет решающее значение для поста­новки диагноза.

Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является кли­ническое, эпидемиологическое, микробиологическое и сероло­гическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микро­организмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.

1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.

2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в до­статочно больших количествах (например, 10 5 -10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определе­ние микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуе­мого образца. Эти количественные показатели могут варьиро­вать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуе­мого материала, характера и стадии заболевания.

3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).

4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроор­ганизмов в разных образцах материала (например, при пище­вых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвот­ных массах, испражнениях, пищевых продуктах).

5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-

ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганиз­мов, выделенные от больных.

6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных мик­роорганизмов.

7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфек­ций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.

8. Совпадение данных лабораторного определения чувстви­тельности микроорганизмов к антибиотикам с эффективнос­тью антимикробной терапии в клинических условиях, под­тверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганиз­мов.

9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппор­тунистические) представляют собой большую группу микроор­ганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, гри­бов, простейших. В клинической микробиологии наиболее час­то встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относя­щиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiel­la, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemo­philus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.

■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРО­БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты лабораторных исследований оформляют на спе­циальных бланках, которые передают лечащему врачу.

1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также дан­ные лабораторного определения чувствительности микроорга­низмов к антибиотикам.

2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и коли­чественные микробиологические показатели.

3. В соответствии с правилами международной номенкла­туры в ответах приводят видовые названия микроорганиз­мов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.

4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, на­пример Proteus sp., Candida sp. и т.д.

Аэробные бактерии Грамположительные бактерии

Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae

Грамотрицательные бактерии

Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica

подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus

Анаэробные бактерии

Неспорообразующие грамотрица­тельные анаэробы

Bacteroides fragilis

и другие виды рода Bacteroides

Prevotella melaninogenica

и другие виды рода Prevotella

Porphiromonas spp.

Fusobacterium spp.

Veilonella spp.

Неспорообразующие грамположи­тельные анаэробы

Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes

Спорообразующие грамположи­тельные анаэробы

Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani

Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспали­тельные процессы различной локализации, в том числе анги­ны, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нор­мальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.

Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэроб­ные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими мик­роорганизмами - вирусами, грибами.

Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

▲ Программа

1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспа­лительной и раневой инфекции, их патогенность, эко­логия, особенности инфекции и эпидемиология вы­зываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические препараты, профилактические и ле­чебные препараты.

А Демонстрация

1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровя­ном агаре.

2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.

3. Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

ЗАНЯТИЕ 1

▲ Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых куль­тур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyo­genes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.

2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содер­жащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.

3. Ознакомиться с питательными средами, применяемы­ми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных пи­тательных сред.

4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

б) микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;

в) наметить план дальнейшего исследования.

ЗАНЯТИЕ 2

Задание студентам

1. Микробиологическое исследование гноя:

а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль­
нейшего исследования;

б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;

в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.

2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам ме­тода секторных посевов. Дать заключение.

3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описа­нием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина в сы­воротке крови больного. Сделать вывод.

4. Дать краткую характеристику демонстрируемым анти­микробным, диагностическим и лечебно-профилакти­ческим препаратам.

Методические указания

Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экс­судат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из иссле­дуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют ти­пичные скопления, чаще располагаются поодиночке или не­большими группами по 2-3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засе­вают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром

Рис. 1.4. Культура дрожжей Sac--charomyces cerevisiae при раз­ных методах микроскопии К с. 14. а - микроскопия мазка, окрашен­ного метиленовым синим; б - тем-нопольная микроскопия; в - фазо-во-контрастная микроскопия- г - люминесцентная микроскопия. Ок­раска корифосфином.

Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.

Рис.3.2.1. "Пестрый ряд". К с. 46.

а - ферментация углевода до кислоты и газа; б - отсутствие ферментации;

в - образование индола; г - образование сероводорода.

Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я" с. 26

пп™Ь Г i dga " ; б ~ реципиент E - coli 1ас "; в - Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *" ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д - рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несу­щих ген gal, на среде Эндо.

Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК " в ™ еленно? из B.subtilis; б - реципиент B.subtilis; в -

селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г ~ рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со й С1 Р ептоми «ином; д - отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е - рост колоний реципиент­ного штамма на среде без стрептомицина.

Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а - рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б - рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в - рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г - отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д - донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е - контакт между бактериями донора и реципиента; ж - реципиент-культура E.coli F", lei", st/; з - отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.

Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.

Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.

Рис.19.1.1. Тельца Бабеша -Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского - Гимзы.

(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инку­бируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрач­ные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перла­мутровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).

Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков

Вид

S.aureus

S.sapro-phyticus

S.epider-midis

Образование:

плазмокоагулазы + - -

лецитиназы + - -

альфа-токсина + - -

Ферментация:

глюкозы + + -

маннита в анаэробных условиях + - +

Чувствительность к новобиоцину S S R

Условные обозначения:(+) - наличие признака; (-) - отсутст­вие признака; S - чувствительный; R - резистентный.

Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафило­кокка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.

Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бакте­рионосителей, после чего проводят их фаготипирование с по­мощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до тит­ра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высу­шивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предвари­тельно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 "С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).

Определение чувствительности стафилококка к антибиоти­кам - см. тему 7.2.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. Основаны на об­наружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологи­ческих реакций.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Микробиологическая диагностика стрептококковых инфек­ций (схема 12.1.2)

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за ис­ключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепоч­ки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиноч­ке или небольшими группами по 2-3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из ко­лоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозритель­ные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолити­ческие, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частич­ного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг коло­нии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культу­ры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-

ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D). Развернутое серологическое иссле­дование и типирование стрептококков проводят главным об­разом для эпидемиологического обследования.

Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков

Вид	Рост при	Рост на средах, содержащих	желчь (40%)
	10"С	45 °С	метиленовый синий (0,1 %)	хлорид натрия (6,5 %)